一、本领概括
及时荧光定量PCR（qPCR）探针法是一种高智谋度、高特异性的核酸定量本领。本施行取舍TaqMan探针法，通过探针上的荧光论说基团与淬灭基团离别开释荧光信号，及时监测PCR扩增进度，都集表率弧线对见解基因进行足够定量，精确忖度样本中核酸的拷贝数或浓度。该风光适用于低丰采靶标检测及严格定量需求的霸术，如病原体载量分析、转基因要素定量等。
二、施行见解
通过构建表率弧线，诳骗探针法qPCR本领对见解基因（如病毒基因组、转基因序列、特定基因抒发财具等）进行足够定量，提供拷贝数或浓度的精确数据，为临床会诊、基因抒发分析、食物安全检测及药物研发提供关节依据。
三、施行经由
1、DNA抽提
取约10mg样品至冷冻研钵中，加入液氮研磨至粉末状，改换至1.5mL离心管中，加200 uL缓冲液GA，玩AG百家乐有没有什么技巧飘舞至绝对悬浮。然后，严格按照“TIANamp Bacteria DNA Kit”讲明书道子进行索求，详见讲明书附件。
最终洗脱体积均为50uL。
2、定量PCR检测
1）将Mix在4℃下溶化，存眷地高下倒置混匀并进行片晌离心。
2）冰上配制下表中的响应液
要素 加入量 终浓度
Premix Ex Taq（Probe qPCR）（2X） 5μL 1×
Forward Primer (10μM) 0.2μL 0.2 μM
Reverse Primer (10μM) 0.2μL 0.2 μM
Probe(10μM) 0.4μL 0.4 μM
ROX Reference Dye Ⅱ（50X） 0.1μL 0.5×
DNA 模板 4.1 μL
3）将响应管进行片晌离心，确保悉数响应液在响应孔底部。
4）取舍三步法门径进行响应：
轮回数 法子 温度 时候
1 预变性 95℃ 20s
40 变性 95℃ 3s
扩增 60℃ 30s
四、本领上风
高特异性：探针与靶序列特异性都集，幸免非特异性扩增干预
高智谋度：可检测低至1拷贝/μL的靶标，适用于痕量样本
足够定量：基于表率弧线提供精确拷贝数，数据可比性强
应用等闲：适用于血液、组织、细胞等多种样本类型
五、适用界限
1️⃣ 病原体载量检测（病毒、细菌、真菌）
2️⃣ 转基因生物（GMO）要素定量分析
3️⃣ 基因抒发足够定量（mRNA/miRNA）
4️⃣ 药物疗效评估（靶基因抒发动态监测）
六、代表性施行
七、客户提供
1 细胞样品: ＞2×107；细胞培养上清≥1ml
动植物组织/细菌、真菌样品: ＞100mg（黄豆粒大小）；
血清、血浆、全血过甚他体液样品: ＞200μl；
RNA/DNA/cDNA: v≥10μl，c≥50ng/μl
2 物种信息及基因信息
（注：组织样品需液氮速冻、保存于-80度ag百家乐可以安全出款的网站，样品使用干冰寄送，幸免混浊和反复冻融）
